红花铁线莲(Clematis coccinea)为毛食科铁线莲属藤本植物,具有较高的观赏价值,也是 好的垂直绿化材料。
主要介绍以铁线莲茎为外植体,进行愈伤组织诱导和植株再生,以及利用试管腋生枝的切段培养,从而获得大量分化苗的快速繁殖方法。
1 材料与方法
1.1 外植体材料及培养条件
1.1.1 材料预处理
选用嫩茎为外植体,将材料用清水冲洗干净。
1.1.2 外植体消毒
将干净的外植体置于超净工作台上,先用70%酒精浸数秒钟,冲洗后放人10%次氯酸钠溶液中消毒15分钟,再用无菌水冲洗3-4次,然后茎切成5-7毫米左右小段,备用。
1.1.3 培养条件
培养温度26℃,光照时间为12小时/天,光强1500-2000lx。
2 结果与分析
2.1 初代培养
将处理好的外植体接种到诱导培养基(配方见文末,下同)上,7天后茎段开始肿大,10天后在茎段切口处出现淡黄色愈伤组织,质地松软,增殖较快,并且极易形成丛生芽,因此可产生许多小植株。
2.2 增殖继代培养
当把小植株切下后,将这些已分化的愈伤组织经切割后,转入新鲜增殖培养基(与诱导培养基相同)。
一个月左右在原较疏松的愈伤组织上出现1至数个表面光滑的瘤状突起,数天后分化出绿色叶尖,而后逐渐发育成许多正常的绿芽。
初期小芽生长缓慢,后生长较快,20天后就可长成2-3厘米高的丛生小植株。这样通过愈伤组织的继代培养,就可不断地获得大量的分化苗。
为了避免由于愈伤组织长期继代培养可能引起的遗传性变异,也可通过腋生枝的切段培养,进行快速繁殖。
将离体小植株,切成小段,每段上具有一对腋芽,接种在增殖培养基上,一星期左右侧芽即萌动,一个月对生侧芽就可长成具有3-4个茎节的小植株,然后再切段培养。
2.3 生根培养
当小植株生长到1.5-2厘米时,由基部切下,接种在生根培养基内,20天左右就可产生不定根,一个月后就可移栽土壤中。
2.4 移栽
离体小植株的移栽,按照常规试管苗移栽方法和栽后管理极易成活。
3 结论
试验证明:铁线莲嫩茎的离体培养,愈伤组织诱导频率高,分化苗增殖系数大,小植株生长快。而铁线莲试管腋生枝切段培养不仅大大提高了繁殖速度,而且可以为实行系列化快速繁殖系统,常年提供大 很完整植株。