掌握组织培养室的消毒及灭菌方法

　　在植物组培工作中,组培室的消毒灭菌以及组培器械消毒灭菌,显的非常重要,接下来我们就一起来学习一下,在植物组培工作中我们实验人员该怎么样对组培室进行消毒,同时植物组培器械又该怎么进行消毒.

　　一、目的要求

　　1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识。

　　2、掌握组织培养室的消毒及灭菌方法。

　　3、掌握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。

　　二、仪器与用具

　　1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等。

　　2、药品：2%新洁尔灭，高锰酸钾，甲醛，70%酒精。

　　三、方法步骤

　　（一）植物组织培养室的灭菌

　　1、地面、墙壁和工作台的灭菌：用2%新洁尔灭喷雾。

　　（1）配方：取新洁尔灭原液20ml，加水980ml，配成2%新洁尔灭溶液。

　　（2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。

　　（3）注意事项：

　　①墙壁、角落、地面喷雾要均匀，不要遗漏；

　　②注意安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。

　　2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸，1年中熏蒸1-2次。

　　（1）配方：每立方米空间用甲醛10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。

　　（2）方法：首先房子要密封。然后在房子中间放一口缸或大烧杯，将称好的高锰酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。

　　（3）注意事项：

　　①操作前要戴好口罩及手套；

　　②倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到高锰酸钾会迅速沸腾，并产生大量烟雾。操作时人要迅速避开烟雾；

　　③3天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。

　　3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。

　　4、用紫外灯照射20—30min。

　　5、使用前，再用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。

　　2、培养用具的灭菌——推荐:ZH-4000系列红外线灭菌器

　　（1）玻璃器皿的灭菌：湿热灭菌法或干热灭菌法。

　　（2）金属器械的灭菌：干热灭菌或火焰灭菌法。使用红外线灭菌器,之前我们很多还是使用酒精灯进行消毒,由于这种酒精灯,有明火不防风而且不能在生物安全柜中使用,效率也比较低,现在各大型植物组培室选择红外线灭菌器

　　（3）布质制品的灭菌：均用湿热灭菌法。

　　使用红外线灭菌器灭菌方法：

　　（1）在使用培养用具前,插上红外线灭菌器电源大约过15分钟左右腔内温度达到900度左右。

　　（2）将接种用具放到腔内,也可对玻璃瓶口进行消毒,6秒左右拿出即可杀灭所以微生物细菌。

　　（3）接种实验接束后也需要对接种用具进行消毒,重复1-2步骤即可.用完关毕电源,待腔内温度冷却后放可放到地方以备下次使用。