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植物组培的培养基配置方法

  这里主要讲的是培养基配方的设计,培养基配方是贯穿整个组培体系的核心,对于培养基的配方可以说多种多样,什么奇怪的培养基都有,不同植物,不同培养阶段都会有针对性的培养基。

  

  现阶段培养基配方有三种获取方法,我说说它们的缺点:

  

  1. 这种获取方法是简单的,当然也是不靠谱的,现阶段国内的研发氛围不是很好,所以有很多文献是滥竽充数的。如果查阅文献,个人推荐先查阅外国文献,可信度较高,但需要一定文献阅读功底,然后是国内一些比较靠谱的杂志,例如植物生理学通讯、看文献记得看出处,有些杂志名字少见的就看看作个参考就行了,后还有便是硕博士论文,这些靠谱程度还是可以的,主要是内容充实,实验更加细致。

  

  2. 组培企业的配方,如果说靠谱的配方便是这个了,这些配方基本都是身经百炼的,而且这些配方都是以营利为基准的,所以配方利用程度很高。但是这些配方都是保密的,只能托一定关系才能得到,而且厂方的配方不是绝对固定的,会随情况而变,还有也可以找相关的高校老师获取,当然需要需要一定的关系了。

  

  3. 自主设计,自己设计的东西一般都比较靠谱,毕竟自己能看到材料的变化。但是一款培养基的实用程度靠的是时间的积累,需要不停的实验,后筛选出好的一款,而且要根据植物以及阶段进行不停的调整,因此自己设计需要更多的耐心和时间。

  

  这里讲的是如何设计一款培养基配方,先写一个培养基配方给大家看看:1/2MS+糖25g/L+琼脂6g/L+活性炭0.5g/L+NAA 0.1mg/L+6-BA 2mg/L+香蕉5% pH5.8,这是一款1L装的石斛兰培养基配方,我们可以划分为几个部分:

  

  基本元素液

  

  上面说的MS(培养基),指的是氮磷钾等植物所需要的各种元素,这种元素液有好几种,常用的有MS、B6、N5、花宝1号等几种,各元素液配方间主要的区别在硝态氮和铵态氮的比例,另外就是其他辅助元素的多少和比例区别。这些配方基本晚上都可以找到,上海,在微生物检测培养方面经验丰富,一般很少有做植物组织培养的。

  

  碳源

  

  就是糖分,组培植物碳源获取方法便是糖份,常用的糖是蔗糖,正规实验室蔗糖都是实验分析纯级别的,价格十分贵,生产厂一般使用食用蔗糖便可以了。除了蔗糖有时还会用到葡萄糖、果糖等糖分,不过价格很高。

  

  培养基凝固剂

  

  指的是配方里的琼脂,用于使培养基呈凝胶状,我们还可以用到卡拉胶、明胶等。如果是液体培养基可以不需要加。

  

  植物生长调节剂

  

  一款培养基配方重要的部分,设计变化多的地方便是这里,一般包括两种:生长素和细胞分裂素。当然还有一些其他特殊作用的激素,如生长抑制剂等。设计时主要考虑的是,加哪种不加哪种,应该加多少,以及两种激素间的比例是多少。这三个问题是设计时考虑的主要问题。

  

  活性炭、香蕉等等都是附加物,这些加了对植物生长有一定作用,但他们的作用机制一直还没弄清楚。

  

  pH值

  

  就是培养基的酸碱度,一般都是5.8很少会对其进行修改,但是如果遇到一些特殊植物对酸碱度有要求时才会有变动。

  

  设计培养基配方简单概括为:将配方的其中一种进行变动,其余不变,同时要设置一个梯度,根据这个梯度观察植物的变化,那种变化符合生产的要求便是值。

  

  设计可以从元素液开始

  

  例如选择不同种元素液,其他不变,观看差异,后选出适合的元素液,同时相同的元素液还有减少大量元素的情况和去除某些元素的情况,例如:1/2MS就是大量元素减半,设计梯度可以这样:1/4MS、1/3MS、1/2MS、MS;

  

  也可以设计出不同的实验组;

  

  附加物有很多,例如:土豆、香蕉、椰汁等,任何东西都可以加进去看效果,一般设计时就3个浓度:5%、10%、15%

  

  激素(植物生长调节剂)是培养基设计的主要要点,不同激素及其不同浓度、组合和配比都能对植物产生明显的变化。设计时,可以先参考一些文献,看看其他人使用什么激素,使用什么浓度梯度,再进行自己的设计。

  

  一般来说想促进分裂便先考虑细胞分裂素、想促进生根便考虑生长素、想使植物变粗变壮便考虑矮壮素。

  

  设计时还要考虑到激素的组合,植物激素永远不是靠一种激素便能很好的调节的,生长素和细胞分裂素一般都是一起加的。


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