多花黄精组培育苗技术

　　多花黄精组培育苗技术

　　多 花 黄 精 （ Ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ ｃｙｒｔｏｎｅｍａ Ｈｕａ） 别 称 九 华 黄 精 ， 系百 合 科 黄 精 属 多 年 生 草 本 植 物 。 黄 精 以 根 状 茎 入 药 ， 集 药 用 、食 用 、 观 赏 和 美 容 价 值 于 一 身 ， 在 研 制 新 药 和 开 发 保 健 品 方 面具 有 广 阔 应 用 前 景。 多 花 黄 精 喜 生 于 缓 坡 、 杂 草 丛 或 林下 荫 地 ， 种 质 资 源 分 布 较 广 。

　　九 华 山 地 区 所 产 多 花 黄 精 品 质 上 佳 ， 有 着 悠 久 的 历 史 文化 渊 源 ， “ 九 华 黄 精 ” 已 经 成 为 国 家 地 理 标 志 产 品 。 随 着 九 华山 旅 游 产 业 的 快 速 发 展 ， 野 生 黄 精 因 市 场 需 求 量 增 加 而 遭 大量 采 挖 ， 使 其 野 生 种 质 资 源 愈 来 愈 少 ， 生 态 平 衡 受 到 破 坏 。 目前 ， 当 地 人 工 栽 培 主 要 采 用 根 茎 进 行 无 性 繁 殖 ， 但 该 方 法 繁 殖系 数 低 ， 根 茎 用 种 量 大 ， 既 提 高 了 成 本 ， 又 限 制 了 多 花 黄 精 的种 植 规 模 ， 且 多 代 根 茎 繁 殖 后 会 造 成 病 毒 的 积 累 和 种 质 的 退化。 因 而 ， 利 用 植 物 组 织 培 养 技 术 建 立 多 花 黄 精 快 速 繁 殖体 系 是 生 产 黄 精 种 苗 的 有 效 途 径 。 目 前 ， 多 华 黄 精 的 研 究 主要 集 中 在 其 成 分 测 定、 药 理 作 用、 育 苗 技 术以 及传 统 人 工 栽 培等 方 面 ， 而 由 于 种 子 具 有 严 重 的 休 眠 特 性 ，关 于 种 子 组 织 培 养 方 面 的 研 究 内 容 鲜 见 报 道 。 本 试 验 主 要 研究 打 破 黄 精 种 子 休 眠 技 术 ， 并 通 过 快 繁 培 养 扩 大 种 苗 规 模 ， 进一 步 进 行 生 根 培 养 诱 导 生 根 ， 最 后 炼 苗 完 成 植 株 再 生 全 过 程 ，旨 在 为 多 花 黄 精 种 苗 工 厂 化 生 产 提 供 科 学 依 据 ， 实 现 短 期 内繁 殖 大 量 种 苗 的 目 的 。

　　１　材 料 与 方 法

　　１． １　材 料

　　２０１３ 年 １０ 月 １３ 日 在 安 徽 省 青 阳 县 陵 阳 镇 分 流 村 黄 精种 植 试 验 基 地 ， 选 取 生 长 健 壮 、 无 病 虫 害 的 优 质 黄 精 单 株 ， 收集 成 熟 的 果 实 。 果 实 使 用 塑 料 袋 密 封 发 酵 １０ ｄ 后 ， 人 工 搓 洗出 种 子。

　　１． ２　方 法

　　１．２． １　多 花 黄 精 种 子 休 眠 的 打 破 　 将 搓 洗 后 得 到 的 多 花 黄精 种 子 ， 用 多 菌 灵 浸 泡 消 毒 ８ ｈ 后 ， 再 用 不 同 的 激 素 组 合 浸 泡２ ｈ 打 破 休 眠 ， 设 以 下 处 理 ： （ １） ３００ ｍｇ／ Ｌ ＧＡ ３ ＋ ３００ ｍｇ／ ＬＫＴ； （ ２） ３００ ｍｇ／ Ｌ ＧＡ ３ ＋ ３００ ｍｇ／ Ｌ ＺＴ； （ ３） ３００ ｍｇ／ Ｌ ＧＡ ３ ＋３００ ｍｇ／ Ｌ ２ －ｉｐ； （ ４） ３００ ｍｇ／ Ｌ ＧＡ ３ ＋３００ ｍｇ／ Ｌ ＢＡ， 另 设 １ 组 无 菌去 离 子 水 处 理 组 为 对 照 ， 处 理 完 成 后 ， 按 种 子 河 沙 体 积 比 １ ∶ ３ 的比 例 混 匀 后 ， 调 节 湿 度 至 ３０％，２５ ℃条 件 下 催 芽 ， 每 个 处 理 １００粒 种 子 ，３ 次 重 复 ，４５ ｄ 后 开 始 统 计 种 子 发 芽 率 和 污 染 率 。

　　１． ２． ２　 组 培 种 芽 消 毒 　 催 芽 完 成 后 ， 选 取 生 长 基 本 一 致 、 芽长 约 ０． ５ ｃｍ 的 多 花 黄 精 种 芽 （ 图 ２） 作 为 外 植 体 ， 使 用 洗 洁 精溶 液 淘 洗 ３ 遍 ， 流 水 冲 洗 ４ ｈ， 无 菌 条 件 下 分 别 使 用 以 下 方 法做 消 毒 处 理 ： （ １） ７５％ 乙 醇 ３０ ｓ ＋ ０． １％ 氯 化 汞 ５ ｍｉｎ； （ ２）７５％ 乙 醇 ３０ ｓ ＋ ０ １％ 氯 化 汞 １０ ｍｉｎ； （ ３） ７５％ 乙 醇 ３０ ｓ ＋０ １％氯 化 汞 １５ ｍｉｎ； （ ４） ７５％ 乙 醇 ＋０． １％ 氯 化 汞 ５ ｍｉｎ ＋ 第２ 天 重 复 处 理 １ 次 ； （ ５） ７５％乙 醇 ＋０． １％氯 化 汞 １０ ｍｉｎ ＋ 第 ２天 重 复 处 理 １ 次 。 消 毒 完 成 后 ， 无 菌 水 洗 ５ 遍 。 接 种 于 ＭＳ培 养 基 中 ， 每 个 处 理 １００ 粒 种 子 ， ３ 次 重 复 ， 于 温 度 ２５ ℃、 １６ ｈ光 照 、 光 照 度 １ ２００ ｌｘ 条 件 下 培 养 ， ７ ｄ 后 统 计 污 染 率 ， 同 时 进一 步 观 察 种 芽 生 长 情 况 （ 图 ３） 。

　　１． ２． ３　快 繁 培 养 　将 多 花 黄 精 芽 在 无 菌 条 件 下 接 种 入 各 预先 配 制 的 快 繁 培 养 基 中 ， 快 繁 培 养 基 设 以 下 处 理 ： （ １） ＭＳ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＢＡ ＋ ０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ； （ ２） ＭＳ ＋ １ ｍｇ／ Ｌ ＢＡ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ； （ ３） ＭＳ ＋ ２ ｍｇ／ Ｌ ＢＡ ＋ ０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ； （ ４）ＭＳ ＋０． ２ ｍｇ／ Ｌ ＫＴ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ； （ ５） ＭＳ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＫＴ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ； （ ６） ＭＳ ＋ １ ｍｇ／ Ｌ ＫＴ ＋ ０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ； （ ７）ＭＳ ＋０． ２ ｍｇ／ Ｌ ＺＴ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ； （ ８） ＭＳ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＺＴ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ； （ ９） ＭＳ ＋１ ｍｇ／ Ｌ ＺＴ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ； 接 种 完成 后 ， 放 入 温 度 ２５ ℃、 １６ ｈ 光 照 、 光 照 度 １ ２００ ｌｘ 条 件 下 培养 ， ４５ ｄ 后 统 计 观 察 快 繁 情 况 。

　　１．２． ４　生 根 培 养 　将 快 繁 后 的 无 菌 苗 分 株 ， 转 接 入 预 先 配 制的 生 根 培 养 基 中 ， 培 养 基 设 以 下 处 理 ： （ １） ＭＳ ＋ １ ｍｇ／ ＬＮＡＡ ＋０． １％ ＡＣ； （ ２） ＭＳ ＋ ２ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ ＋ ０． １％ ＡＣ； （ ３）ＭＳ ＋３ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ ＋０． １％ ＡＣ； （ ４） ＭＳ ＋１ ｍｇ／ Ｌ ＩＢＡ ＋０． １％ＡＣ； （ ５） ＭＳ ＋２ ｍｇ／ Ｌ ＩＢＡ ＋０． １％ ＡＣ； （ ６） ＭＳ ＋３ ｍｇ／ Ｌ ＩＢＡ ＋

　　０． １％ ＡＣ； （ ７） ＭＳ ＋ １ ｍｇ／ Ｌ ＢＡ ＋ ２ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ ＋ ０． １％ ＡＣ；（ ８） ＭＳ ＋ １ ｍｇ／ Ｌ ＢＡ ＋ ２ ｍｇ／ Ｌ ＩＢＡ ＋ ０． １％ ＡＣ； 放 入 温 度２５ ℃、 １６ ｈ 光 照 、 光 照 度 １ ２００ ｌｘ 条 件 下 培 养 ， ４５ ｄ 后 统 计 观察 生 根 情 况 （ 图 ５） 。

　　１． ２． ５　炼 苗 　待 无 菌 苗 在 瓶 中 完 成 生 根 ， 打 开 瓶 盖 ３ ｄ， 使 无菌 苗 初 步 适 应 外 界 环 境 ， 使 用 营 养 土 、 蛭 石 、 沙 不 同 的 比 例 配制 生 根 移 栽 基 质 ， 将 无 菌 苗 洗 净 移 栽 入 基 质 中 ， 每 天 喷 水 ， 保持 足 够 湿 度 ， ４５ ｄ 后 统 计 种 苗 存 活 情 况 （ 图 ５） 。

　　２　结 果 与 分 析

　　２． １　不 同 激 素 处 理 对 种 子 休 眠 的 影 响研 究 发 现 ， 在 不 使 用 激 素 的 情 况 下 ， 多 花 黄 精 种 子 的 发 芽率 很 低 ， 只 有 约 ９． ３％， 且 发 芽 时 间 长 ， 发 芽 不 整 齐 （ 表 １） 。

　　这 说 明 多 花 黄 精 种 子 具 有 较 强 的 休 眠 性 ， 因 而 自 然 条 件 下 多花 黄 精 种 子 无 法 用 于 大 量 繁 殖 种 苗 ； 不 同 浓 度 的 激 素 结 合ＧＡ ３ 可 以 有 效 打 破 多 花 黄 精 种 子 的 休 眠 ， 最 合 适 的 浓 度 为３００ ｍｇ／ Ｌ ＧＡ ３ ＋ ３００ ｍｇ／ Ｌ ２ － ｉｐ 的 激 素 处 理 ， 其 发 芽 率 达 到９１． ７％， 基 本 完 成 了 对 种 子 休 眠 的 打 破 （ 表 １） 。

　　２． ２　种 芽 消 毒 方 式

　　研 究 发 现 ， 氯 化 汞 处 理 时 间 从 ５ ｍｉｎ 提 高 到 １５ ｍｉｎ， 染 菌率 从 ６８． ６％降 低 到 ９． ３％， 但 是 对 种 苗 的 毒 害 作 用 也 逐 渐 变大 ， 单 独 处 理 的 效 果 并 不 理 想 。 而 使 用 低 剂 量 、 重 复 次 数 可 以减 少 对 种 苗 的 毒 害 作 用 ， 使 用 ７５％ 乙 醇 ３０ ｓ ＋ ０． １％ 氯 化 汞５ ｍｉｎ ＋ 第 ２ 天 重 复 的 处 理 ， 可 以 使 种 苗 的 污 染 率 控 制 在１１． ６％， 且 对 种 芽 伤 害 最 低 ， 种 芽 在 ４ ｄ 后 就 可 变 绿 ， 展 出 真叶 ， 综 合 来 看 ， 使 用 ７５％乙 醇 ３０ ｓ ＋０． １％氯 化 汞 ５ ｍｉｎ ＋ 第 ２天 重 复 是 较 为 合 适 的 消 毒 处 理 方 法。

　　２． ３　激 素 对 组 培 苗 快 繁 的 影 响

　　研 究 发 现 ， 将 成 苗 的 黄 精 组 培 苗 转 接 入 不 同 的 快 繁 培 养基 中 后 ， 黄 精 种 芽 组 培 苗 对 ＫＴ 和 ＺＴ 较 敏 感 ， 其 增 殖 系 数 要高 于 同 浓 度 的 ＢＡ， 但 会 出 现 大 量 畸 形 叶 ， 即 使 使 用 浓 度 较 低仍 有 较 多 畸 形 叶 片 出 现 （ 表 ３） 。 因 此 ， 使 用 ＢＡ 要 比 ＫＴ 和ＺＴ 更 适 用 于 多 花 黄 精 种 苗 ， 结 合 增 殖 系 数 和 组 培 苗 生 长 情况 ， 最 适 宜 的 快 繁 培 养 基 为 ： Ｓ ＋１ ｍｇ／ Ｌ ＢＡ ＋０． ５ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ，此 时 可 以 达 到 较 好 的 增 殖 系 数 和 组 培 苗 正 常 的 生 长 。

　　２． ４　激 素 对 组 培 苗 生 根 的 影 响

　　将 快 繁 后 的 种 苗 分 株 接 入 不 同 的 生 根 培 养 基 中 后 发 现 ，ＮＡＡ 对 多 花 黄 精 组 培 苗 生 根 效 果 要 好 于 ＩＢＡ， 而 加 入 少 量 ＢＡ虽 然 对 老 叶 片 发 黄 有 一 定 抑 制 作 用 ， 但 会 降 低 根 长 和 生 根 数（ 表 ４） 。 因 此 ， 综 合 生 根 效 果 和 经 济 性 ， 适 宜 的 生 根 配 方 为 ：ＭＳ ＋２ ｍｇ／ Ｌ ＮＡＡ ＋０． １％ＡＣ， 在 此 配 方 下 的 生 根 数 达 到 ５． ５条 ， 根 长 达 到 ４． １ ｃｍ。

　　２． ５　移 栽 基 质 对 组 培 苗 炼 苗 的 影 响

　　选 取 生 根 基 本 一 致 的 组 培 苗 进 行 炼 苗 处 理 ， 依 次 栽 种 入不 同 移 栽 基 质 ， 发 现 沙 比 蛭 石 更 适 合 作 为 多 花 黄 精 炼 苗 基 质 ，而 同 时 加 入 沙 、 蛭 石 和 单 独 使 用 沙 对 种 苗 存 活 和 生 长 并 无 明显 差 距 （ 表 ５） 。 因 此 ， 结 合 植 株 存 活 率 和 经 济 性 ， 在 大 规 模 炼苗 生 产 中 应 选 择 泥 炭 ∶ 沙 ＝２ ∶ １ 的 移 栽 基 质 配 方 ， 存 活 率 达到 ８３％以 上 ， 能 够 达 到 移 栽 种 植 多 花 黄 精 组 培 苗 的 要 求 。