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组织培养过程遇到污染如何处理

组织培养 植物组培室

组织培养过程中的污染源主要有以下几种:

(1)户外风大,菌类进屋机会多。有风就有沙,有沙就有尘,有尘就有菌,菌尘共存,这是菌类进屋的主要原因之一。

(2)屋内太潮,菌类繁衍多。需保持室内空气干燥,如使用空调“除湿”功能,也可减少真菌生长繁殖。

(3)人员带菌多。在整个操作室内,人员可说是最大的带菌者,不管在毛发或是衣服等地方,都隐藏着数不清的菌类。在进入操作室前,最好能对作业人员进行清洁处理,比如换上干净的白大褂,换上实验室的鞋,衣服鞋每星期洗一次,上超净台前手要用肥皂清洗两遍,接种前手再用酒精擦拭一遍。

(4)屋内不干净。紫外线能杀灭或抑制真菌生长,因此应在每次接种前进行20分钟的紫外灯消毒。

(5)清理屋内带菌组培苗。在植物病害中,真菌所引起的病害尤其严重,且因会产生孢子,随着空气飘散。一旦落入适当的环境下,一粒小小的孢子便会扩大成一个菌落,污染整个组织培养瓶。因此一旦有真菌污染的组培苗,就要用高压灭菌器彻底消灭,以防扩散。(6)接种不正确。不正确操作也会增加污染机率,如开盖太快,灭菌不够,操作过慢等。接种过程应该轻开盖,快操作。

组织培养过程遇到污染如何处理

组培室污染原因

若污染菌类是零星分散在培养基中,则可确定是人为引起的污染,比如培养基灭菌不彻底;超净工作台长时间不换滤网,致使净化能力降低;接种用具灭菌不彻底;操作不正确,动作生硬缓慢,开瓶时间太久,接种台摆放物品杂乱,操作中心在人体范围之内;接种室长期不灭菌,菌类太多等。

若污染菌类是从材料周围长起,则可证明是植物材料带菌引起。可能是接种用具灭菌不彻底,接种时材料被污染;或者是未及时发现污染苗,接种过程交叉感染等。

若菌类从材料培养基以上部分长起,而不是从培养基先长起,且发生在5天以后,则说明是材料带的内生菌。若从培养基以下开始长菌,发生时间较早,且有从里向外的趋势,则说明是切口引起的污染,原因可能是灭完菌后,未剪去两个切口或虽剪但器具带菌。

污染苗如何抢救?

真菌污染后,如果已形成孢子,则必须经高压灭菌后扔掉,即使仅形成菌丝也应处理后扔掉,因为菌丝能够达到材料内部,因此,真菌污染是灭绝性的。

细菌污染后,由于细菌繁殖是靠芽孢,细菌不会弥散在整个空间,因此只要及时发现,可将材料上部未感菌的部分剪下转接,材料仍可以用。

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